申请日2018.11.23
公开(公告)日2019.03.26
IPC分类号G01N33/569
摘要
本发明公开了本发明提供一种大肠杆菌的快速检测方法，包括以下步骤：1.培养基配制;2.无菌操作取25g(mL)样品到均质袋中，并向其中加入225mL预热后的增菌培养基，放入均质器中均质2min;42℃静止或者振荡培养6h,根据需要也可以延长至24h;取0.1mL上述增菌液，加入含1mL选择性培养基的5mL玻璃管内，42±1℃继续培养18‑24 h;3.将样品垫、结合垫(含金标抗体，干燥)、硝酸纤维素膜,吸水垫依次贴在带有黏合剂的PVC背板上，切成4mm宽的试纸，室温干燥备用。4.将培养物混合均匀，取1mL到试管中沸水(100℃)加热10min，冷却至室温，用滴管滴加3‑4滴至胶体金试纸的样品孔，反应5‑10min，判读结果，超过30min显色无效。本发明为面向医药废水中粪大肠菌群快速检测提供了一种便捷有效地途径。
权利要求书
1.面向医药废水中粪大肠菌群快速检测方法，其特征在于：
包括以下步骤。
2.培养基配制
1) 增菌培养基配制：称取26.5g 增菌培养基，加入预热42 ± 1℃去离子水1 L ，充分溶解，备用;
2) 选择性培养基配制：称取7.5g选择培养基，加入预热42±1℃去离子水10mL，充分溶解，备用。
3.无菌操作取 25g (mL)样品到均质袋中，并向其中加入225mL预热后的增菌培养基，放入均质器中均质 2min ，42℃静止或者振荡培养6h，根据需要也可以延长至24h，取0.1mL上述增菌液，加入含1mL选择性培养基的5mL玻璃管内，42±1℃继续培养18-24h。
4.将样品垫、结合垫(含金标抗体，干燥)、硝酸纤维素膜(检测线：大肠杆菌O157：H7多抗1mg/mL;质控线：兔抗羊1mg/mL),吸水垫依次贴在带有黏合剂的PVC背板上，切成4mm宽的试纸，室温干燥备用。
5.将培养物混合均匀，取1mL到试管中沸水(100℃)加热10min，冷却至室温，用滴管滴加3-4滴至胶体金试纸的样品孔，反应5-10min，判读结果，超过30 min显色无效。
6.根据权利要求 1所述的一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于，所述增菌培养基包括以下原料(按重量份数计)：葡萄糖80份、七水合硫酸模0.5-1.5份、硫酸镀3-5份、硝酸纳3-5份、酵母粉20-25份、棉籽蛋白5-15份、蛋白胨5-14份、磷酸二氢钾0.2-3份、磷酸氢二钾0.5-5份。
7.根据权利要求 1所述的一种大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于：所述选择性培养基包括以下原料(按重量份数计)：乳糖10～26份，琼脂 15～20份，牛胆盐1～7份，氯化钠2～7份，亚碲酸钾2.5～7.5份，山梨醇 10～20份 ，肌醇4～7份，蛋白胨15～25份，羧甲基纤维素纳0.01～0.9份，磷酸氢二钾2.5～7.5份。
说明书
面向医药废水中粪大肠菌群快速检测方法
技术领域
本发明涉及粪大肠菌群的检测技术领域，尤其涉及面向医药废水中粪大肠菌群快速检测方法。
背景技术
粪大肠菌群是生长于人和温血动物肠道中的一组肠道细菌，随粪便排出体外，约占粪便干重的1/3以上，故称为粪大肠菌群。受粪便污染的水、食品、化妆品和土壤等物质均含有大量的这类菌群。若检出粪大肠菌群即表明已被粪便污染。大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等)，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。准确及时的检测手段是预防和控制病原微生物传播的关键。目前大肠杆菌的检测多采用传统的微生物培养的方法，主要包括前增菌、选择性增菌、平板分离、生化试验和鉴定等步骤，涉及的实验较多、操作较烦琐、检测周期较长、准备和收尾工作繁重，已无法满足现阶段食品中致病菌快速检测的现实需要。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供面向医药废水中粪大肠菌群快速检测方法。
面向医药废水中粪大肠菌群快速检测方法，包括以下步骤：
1.培养基配制
1) 增菌培养基配制：称取26.5g 增菌培养基，加入预热42 ± 1℃去离子水1 L ，充分溶解，备用;
2) 选择性培养基配制：称取7.5g选择培养基，加入预热42±1℃去离子水10mL，充分溶解，备用。
2.无菌操作取 25g (mL)样品到均质袋中，并向其中加入225mL预热后的增菌培养基，放入均质器中均质 2min ，42℃静止或者振荡培养6h，根据需要也可以延长至24h，取0.1mL上述增菌液，加入含1mL选择性培养基的5mL玻璃管内，42±1℃继续培养18-24h。
3.将样品垫、结合垫(含金标抗体，干燥)、硝酸纤维素膜(检测线：大肠杆菌O157：H7多抗1mg/mL;质控线：兔抗羊1mg/mL),吸水垫依次贴在带有黏合剂的PVC背板上，切成4mm宽的试纸，室温干燥备用。
4.将培养物混合均匀，取1mL到试管中沸水(100℃)加热10min，冷却至室温，用滴管滴加3-4滴至胶体金试纸的样品孔，反应5-10min，判读结果，超过30 min显色无效。
比上述方案更进一步的，所述增菌培养基包括以下原料(按重量份数计)：葡萄糖80份、七水合硫酸模0.5-1.5份、硫酸镀3-5份、硝酸纳3-5份、酵母粉20-25份、棉籽蛋白5-15份、蛋白胨5-14份、磷酸二氢钾0.2-3份、磷酸氢二钾0.5-5份。
比上述方案更进一步的，所述选择性培养基包括以下原料(按重量份数计)：乳糖10～26份，琼脂 15～20份，牛胆盐1～7份，氯化钠2～7份，亚碲酸钾2.5～7.5份，山梨醇 10～20份 ，肌醇4～7份，蛋白胨15～25份，羧甲基纤维素纳0.01～0.9份，磷酸氢二钾2.5～7.5份。
本发明的有益效果是：本发明提供了一种快速灵敏的检测样品中的大肠杆菌的方法，为大肠杆菌的快速定性检测提供了二种便捷有效地途径。缩短大肠杆菌检测时间，加快检测进程，缩短检测人员的劳动时间，降低劳动强度，节省水电及储存清洁等成本，提高检测效率，降低检测成本，便于现场检测，提高准确度。