公布日：2023.10.27
申请日：2023.07.19
分类号：C12N1/20(2006.01)I;C02F3/34(2023.01)I;C02F3/02(2023.01)I;C12R1/38(2006.01)N;C12R1/01(2006.01)N;C12R1/22(2006.01)N;C02F101/36(2006.01)N;
C02F101/34(2006.01)N;C02F101/30(2006.01)N
摘要
本发明提供一种用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂及其制备方法和应用，复合微生物菌剂由复合微生物菌剂由嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)，柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)组成。通过采用本发明的技术方案，各组分种群相互协同，强化对生产废水的降解效能，且对于对氯间二甲苯酚的含量也能够通过生物作用的方法进行去除，降解方法针对性强、响应时间快、操作简单，可以应用于含有对氯间二甲苯酚的生产废水中，同时还能够有效降低废水的COD。
权利要求书
1.一种用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂，复合微生物菌剂由复合微生物菌剂由嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)，柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)组成。
2.根据权利要求1所述的用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂中，各菌株的菌细胞浓度百分比为嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)5％-10％、柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)5％-10％。
3.根据权利要求1或2所述的用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂为液体菌剂；所述液体菌剂中菌细胞浓度为≥109个/mL。
4.根据权利要求3所述的用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂对含对氯间二甲苯酚生产废水的COD降解率≥85％，对对氯间二甲苯酚的分解率可达70％。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)、耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)、硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)、球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)、克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)、柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)和弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)活化；S2、将活化后的8种菌株分别接种到培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；S3、按嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)5％-10％、柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)5％-10％的菌细胞浓度百分比将8种菌液混合，得到所述复合微生物菌剂。
6.根据权利要求5所述的用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述培养基包括营养琼脂平板培养基和LB液体培养基；将活化后的菌株分别接种至所述营养琼脂平板培养基中长出比较均一、规则的菌落后，再接种至所述LB培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL。
7.根据权利要求6所述的用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述营养琼脂平板培养基中培养条件包括25℃-30℃温度下培养24h-48h；所述LB液体培养基中培养条件包括好氧培养、30℃温度条件下培养24h-48h。
8.一种如权利要求1-4任一项所述的用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)，柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)活化；S2、将10种活化后的菌株分别接种到培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；S3、将S2培养后的菌种分别按10％的接种量接种入500L种子罐，好氧培养至对数生长期，所述种子罐中的培养基为LB液体培养基；S3、将种子液按10％接种量接入生产罐中培养，所述生产罐中的培养基与所述种子罐中的培养基相同；S4、在所述生产罐结束后菌体数量≥10亿个/mL，完成后分别出罐，依照菌细胞百分比浓度比例将10种菌混合，即为所述复合微生物菌剂的液体菌剂。
9.根据权利要求8所述的用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述生产罐中的培养条件包括搅拌速度为180～240r/min，培养温度为30℃，整个工艺流程培养时间为48～60h。
10.如权利要求1-4任一项所述的用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂或如权利要求5-8任一项所述的制备方法得到的所述复合微生物菌剂在处理含对氯间二甲苯酚生产废水的应用，接种量为1～5g/L。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种用于处理含对氯间二甲苯酚(PCMX)生产废水的复合微生物菌剂及其制备方法和应用，通过各组分种群的相互协同作用，强化对降解底物的降解效能、响应时间快、操作简单。
为了达到上述目的，本申请提供如下技术方案：
一种用于处理含对氯间二甲苯酚生产废水的复合微生物菌剂，复合微生物菌剂由复合微生物菌剂由嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)，柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)组成。
优选地，所述复合微生物菌剂中，各菌株的菌细胞浓度百分比为嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)5％-10％、柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)5％-10％。
优选地，所述复合微生物菌剂为液体菌剂。
优选地，所述液体菌剂中菌细胞浓度为≥109个/mL。
本发明还提供了上述复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
S1、将嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)、耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)、硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)、球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)、克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)、柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)和弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)活化；
S2、将活化后的8种菌株分别接种到培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；
S3、按嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)5％-10％、柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)5％-10％的菌细胞浓度百分比将8种菌液混合，得到所述复合微生物菌剂。
优选地，所述培养基包括营养琼脂平板培养基和LB液体培养基；将活化后的菌株分别接种至所述营养琼脂平板培养基中长出比较均一、规则的菌落后，再接种至所述LB培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL。
优选地，所述营养琼脂平板培养基中培养条件包括25℃-30℃温度下培养24h-48h；所述LB液体培养基中培养条件包括好氧培养、30℃温度条件下培养24h-48h。
进一步地，上述制备方法的具体步骤还包括：
S1、将嗜碱假单胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假单胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基还原假单胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形赖氨酸杆菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌属(Klebsiellasp.)5％-10％、柠檬酸杆菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)5％-10％活化；
S2、将10种活化后的菌株分别接种到培养基中，直至每种培养基中菌细胞浓度≥109个/mL；
S3、将S2培养后的菌种分别按10％的接种量接种入500L种子罐，好氧培养至对数生长期，所述种子罐中的培养基为LB液体培养基；
S3、将种子液按10％接种量接入生产罐中培养，所述生产罐中的培养基与所述种子罐中的培养基相同；
S4、在所述生产罐培养结束后菌体数量≥10亿个/mL，完成后分别出罐，依照菌细胞百分比浓度比例将10种菌混合，即为所述复合微生物菌剂的液体菌剂。
优选地，所述生产罐中的培养条件包括搅拌速度为180～240r/min，培养温度为30℃，整个工艺流程培养时间为48～60h。
将上述复合菌剂应用于含对氯间二甲苯酚生产废水的处理中，能够将排除的废水中的对氯间二甲苯酚的含量降低至30％以下，且对所述复合微生物菌剂对含对氯间二甲苯酚生产废水的COD降解率≥85％。
尤其地，对于含有对氯间二甲苯酚的生产废水应当都具有上述效果。
本发明所获得的有益技术效果：
1.通过采用本发明的技术方案，各组分种群相互协同，强化对降解底物的降解效能，并通过微生物降解的方法，处理对氯间二甲苯酚有机的含量，针对性强，降解方法针对性强、响应时间快、操作简单，可以应用于COD的降解，也可以应用于含对氯间二甲苯酚废水好氧处理。
2.通过采用本发明的技术方案，将复合微生物菌剂应用于实现的生产废水好氧处理中，借助复合菌剂的优势，能够大大降低生产废水中COD与对氯间二甲苯酚的含量等作用，处理效果稳定，能够实现达标排放。
（发明人：张红日;钟隆鸣;刘秀艳）