申请日2016.10.08
公开(公告)日2020.02.04
IPC分类号C12N1/20; C12N1/16; C02F3/34; C12R1/385; C12R1/46; C12R1/72
摘要：
本发明公开了一种复合菌剂及其应用，属于工业微生物技术领域。本发明提供的复合菌剂包括铜绿假单胞菌，链球菌，和假丝酵母，分别将所述菌株在各自对应的培养基中进行培养至OD600=1，再按菌液体积比为5:3:2进行混合。将本发明的菌剂以5～10%的接种量接种至油脂污水中反应48h后，油脂降解率达90.2%，能够在工业上进行规模化应用，具有投入小，效率高，无二次污染等优点。
权利要求书
1.一种降解油脂废水中油脂的复合菌剂，其特征在于，包括铜绿假单胞菌、链球菌、假丝酵母，所述菌剂是将驯化后的铜绿假单胞菌、链球菌、假丝酵母分别培养至OD600=1~1.2，再以5:3:2的体积比将菌液进行混合;所述铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)BBE，其保藏编号为CCTCC NO：M 2011185;所述链球菌为链球菌(Streptococcus equi subsp. zooepidimicus)WSH-24，其编号为ATCC 35246;所述假丝酵母为假丝酵母(Yarrowia lipolytica)WSH-Z06，其保藏编号为CCTCC NO：M 20714;具体的，所述复合菌剂通过以下方法制备：
将所述铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌进行驯化;所述驯化是在驯化培养基中进行;所述驯化培养基成分为：(NH4)2SO4 0.5 g/L，NaCl 0.5 g/L，K2HPO40.3 g/L，MgSO4·7H2O 0.2 g/L，蛋白胨 1.0 g/L，以5 d为培养周期，驯化培养基中的大豆油浓度依次增加至1 g/L、2 g/L、 3 g/L、 4 g/L进行驯化，将驯化后的铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌分别接种至相应基础培养基进行培养，使其OD600=1~1.2;再将驯化后的铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌们的培养液以5：3：2的比例混合，制备复合菌剂。
2.一种降解油脂废水中油脂的方法，其特征在于，向油脂废水中加入权利要求1所述复合菌剂，在30℃下反应10~60 h，所述复合菌剂的添加量按体积比为5%。
3.权利要求1所述菌剂在油脂废水处理中的应用。
说明书
一种复合菌剂及其应用
技术领域
本发明涉及一种复合菌剂及其应用，属于工业微生物技术领域。
背景技术
在我国，水污染仍是一个严峻的问题。工业废水、城市生活废水排量都很大。全国地下水受到点状或面状的污染。油脂废水主要来源工业、农业、运输和生活废水排放。油脂覆盖在水体表面，阻断空气中的氧向水体扩散，从而使水体自净能力下降，水中生态平衡遭到破坏。目前。处理油脂废水的方法主要有物理法、化学法和生物法。物理法主要是根据水和油互不相容，密度不同，利用重力和离心力将两者分散，如重力分离法、粗粒化法、过滤吸附法、膜分离法等等。化学法主要是利用化学物质对废水中的有机物进行化学分解，对有用有机物质造成损失，也容易造成二次污染。常用方法有化学破乳除油和化学氧化等。生物法处理油脂废水主要是利用微生物将油脂水解成甘油、脂肪酸，最终分解氧化成水喝二氧化碳等产物。生物法处理废水中的油脂具有投入小，效率高，无二次污染等优点。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种复合菌剂，包括铜绿假单胞菌，链球菌，假丝酵母，所述菌剂是以5:3:2的体积比将分别培养至OD600=1～1.2菌液进行混合。
在本发明的一种实施方式中，所述复合菌剂由铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌BBE，链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06组成。
在本发明的一种实施方式中，所述铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌们经过驯化;所述驯化是在驯化培养基中进行;所述驯化培养基成分为：(NH4)2SO40.5g/L，NaCl 0.5g/L，K2HPO40.3g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/L，蛋白胨1.0g/L，豆油1～4g/L。
本发明的第二个目的是提供所述菌剂的制备方法，是将铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06分别接种至培养基，于30℃条件下培养至菌体浓度为OD600=0.1;然后将铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06细胞液们以5:3:2比例混合。
在本发明的一种实施方式中，将所述铜绿假单胞菌BBE接种至LB培养基中进行培养。
在本发明的一种实施方式中，将所述链球菌WSH-24接种至马铃薯蔗糖培养基中进行培养。
在本发明的一种实施方式中，将所述假丝酵母WSH-Z06接种至含有酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，无水葡萄糖20g/L的培养基中进行培养。
本发明的第三个目的是提供一种降解油脂废水中油脂的方法，是向油脂废水中加入所述复合菌剂，在30℃下反应10～60h。
在本发明的一种实施方式中，所述复合菌剂的添加量按体积比为5～10%。
本发明还提供所述菌剂在污水处理中的应用。
本发明的有益效果：本发明提供了一种复合菌剂，能够有效降解油脂废水中的油脂。将本发明的菌剂接种至油脂废水中反应48h后，降解率达90.2%。
具体实施方式
油脂降解率的测定：
采用UV-2450型紫外-可见光分光光度计对反应液中油脂含量进行测定。取反应液10mL，加1.5mL硫酸酸化后转入分液漏斗，取5mL甲苯加入分液漏斗，震荡后静置分层萃取。将萃取过后的水样到回原分液漏斗中，加5mL甲苯重复萃取一次。将萃取液混匀用甲苯稀释，在324nm波长下测定萃取液的吸光值。根据油脂与吸光值的标准曲线可计算出油脂的浓度。
培养基：
驯化培养基(g/L)：(NH4)2SO4 0.5，NaCl 0.5，K2HPO4 0.3，MgSO4·7H2O 0.2，蛋白胨1.0，豆油浓度从1g/L依次增加到4g/L。
检测培养基(g/L)：(NH4)2SO4 5.0，Na2HPO4 2.0，K2HPO4 2.0，NaCl 2.0g，MgSO40.5，大豆油20mL。
LB培养基(g/L)：酵母粉5，蛋白胨10，氯化钠5，用于培养铜绿假单胞菌。
马铃薯蔗糖培养基(g/L)：马铃薯200，蔗糖20，用于培养链球菌WSH-24。
假丝酵母WSH-Z06基础培养基(g/L)：酵母粉5，蛋白胨10，无水葡萄糖20。
实施例1复合菌剂的制备
1、菌株的驯化：将铜绿假单胞菌BBE(保藏编号CCTCC NO：M 2011185)、链球菌WSH-24(购自ATCC，其编号为ATCC 35246)和假丝酵母WSH-Z06(保藏编号为CCTCC NO：M 20714)分别接种至不含大豆油的驯化培养基中，以5d为培养周期，驯化培养基中的大豆油浓度依次增加至1g/L、2g/L、3g/L、4g/L进行驯化，将驯化前后的菌液分别在检测培养基中反应，测定油脂降解效果，结果如表1所示。经过驯化，假丝酵母WSH-Z06油脂降解率提高至78.2%，铜绿假单胞菌BBE和链球菌WSH-24的油脂降解率分别提高至50.1%和43.9%。
2、将驯化后的铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌分别接种至相应基础培养基进行培养，使其OD600=1～1.2。
3、将铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌们的培养液以5：3：2的比例混合，制备复合菌剂。
表1三株菌驯化前后菌株的油脂降解率(%)
实施例2复合菌剂降解油脂废水
按实施例1的步骤制备复合菌剂，其区别在于，不对菌株进行驯化。将菌剂以5%的添加量接种至油脂废水中，于30℃反应48h，计算降解率。结果显示，未经驯化制备的菌剂对油脂的降解率达63.5%.
实施例3复合菌剂降解油脂废水
将实施例1制备的菌剂分别以不同添加量接种至油脂废水中，于30℃反应48h，计算降解率，结果如表2所示。将菌剂以5～10%的体积比进行接种，油脂降解率达80%以上，具有显著的效果。
表2不同条件下油脂降解率
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。（发明人：崔明虎;徐彬;郑展望;陈坚;周景文;曹晓梅）