申请日2019.07.18
公开(公告)日2019.10.29
IPC分类号C02F3/30; C02F3/34; C02F101/16
摘要
本发明公开了一种反硝化施氏假单胞菌强化缺氧池污水脱氮方法，取原水接到装有反硝化培养基的锥形瓶中富集驯化;取富集培养物转接到新鲜反硝化培养基，继续富集驯化;取适量菌液稀释后涂布于含有LB培养基的LB固体平板上进行培养，待平板上长出单菌落，挑取单菌落分别接种到反硝化培养基中进行复筛;选取脱氮效率高的菌株;从平板上挑取菌株QFPS单菌落，接种于LB培养基中培养，菌沉淀用无菌生理盐水悬浮后接种于反硝化培养基的锥形瓶中。本发明的有益效果是反硝化菌QFPS反硝化脱氮效率受溶解氧水平影响小，缺氧条件下，菌株聚集成团，具有良好的沉降性能，能够有效避免应用过程中菌体流失，且该菌株能够大幅度提高AAO工艺缺氧池污泥污水反硝化脱氮效率。
权利要求书
1.一种反硝化施氏假单胞菌强化缺氧池污水脱氮方法，其特征在于：菌株QFPS分离自生活污水处理厂原水，取原水接到装有反硝化培养基的锥形瓶中富集驯化;取富集培养物转接到新鲜反硝化培养基继续富集驯化;取适量菌液稀释后涂布于含有LB培养基的LB固体平板上进行培养，待平板上长出单菌落，挑取单菌落分别接种到反硝化培养基中进行复筛;选取脱氮效率高的菌株;从平板上挑取菌株QFPS单菌落，接种于无菌液体LB培养基中培养至OD>0.8;取菌悬液离心,倒去上清液;菌沉淀用无菌生理盐水悬浮，离心,倒去上清液;菌沉淀用无菌生理盐水悬浮后接种于装有含有反硝化培养基的锥形瓶中。
2.按照权利要求1所述一种反硝化施氏假单胞菌强化缺氧池污水脱氮方法，其特征在于：所述菌株QFPS分离自生活污水处理厂原水，取10ml原水接到装有100mL反硝化培养基的250mL的锥形瓶中，20℃、180r/min富集驯化3d;取富集培养物10ml转接到新鲜反硝化培养基，20℃、180r/min继续富集驯化3d;取适量菌液稀释后涂布于含有LB培养基的LB固体平板上进行培养，待平板上长出单菌落，挑取单菌落分别接种到反硝化培养基中进行复筛;选取脱氮效率高的菌株;从平板上挑取菌株QFPS单菌落，接种于5ml无菌液体LB培养基中培养至OD>0.8;取2ml菌悬液以4000r/min离心5min,倒去上清液;菌沉淀用无菌0.9%生理盐水悬浮，4000r/min离心5min,倒去上清液;菌沉淀用无菌0.9%生理盐水悬浮后接种于装有含有100mL反硝化培养基的250mL的锥形瓶中。
3.按照权利要求1所述一种反硝化施氏假单胞菌强化缺氧池污水脱氮方法，其特征在于：所述LB培养基：酵母粉5份，蛋白胨5份，NaCl10份，琼脂占总重量的1.5%，pH7.0。
4.按照权利要求1所述一种反硝化施氏假单胞菌强化缺氧池污水脱氮方法，其特征在于：所述反硝化培养基:丁二酸钠2份,NaNO3 2份,K2HPO4 0.5份，FeSO4·7H2O 0.1份，MnSO4·7H2O 0.05份，pH值7.0。以上培养基均在121℃下灭菌20min后使用。
说明书
一种反硝化施氏假单胞菌强化缺氧池污水脱氮方法
技术领域
本发明属于污水处理技术领域，涉及兼性厌氧反硝化施氏假单胞菌QFPS及其在强化AAO工艺缺氧池污水脱氮中的应用。
背景技术
近年来，人们生活水平日益提高、城市化速度不断加快，随之而来的水环境污染问题日益严重，尤其是，过量的氮、磷等植物性营养元素进入水体导致水体富营养化等问题，已成为当前水环境领域监测和治理的重点。水体富营养化的危害在于：1)促使水体中藻类过量生长，部分藻类产生的藻毒素直接威胁到对水生动物和人类健康;2)过量生长的藻类漂浮在水体表面导致水体透明度大大降低，使得深层水体的光合作用减弱、出现缺氧乃至无氧状态，导致底栖需氧水生生物难以生存;3)藻类死亡后，异养微生物大量繁殖，进一步降低水体中的溶解氧含量，进一步加剧水质恶化和水生态环境的破坏。氮污染是导致水体富营养化的重要因素之一，也是污水处理达标排放的重要评价指标之一。污水脱氮主要分为物理化学法和生物脱氮法两种。其中，由于微生物无处不在、生长繁殖快、代谢效率高和绿色环保等特点，利用微生物实现污水脱氮是目前污水脱氮的主要手段。微生物脱氮过程分为硝化和反硝化两个阶段：首先，在有氧条件下，硝化细菌将废水中的含氮化合物氧化为硝酸盐，即硝化阶段;然后，在缺氧条件，反硝化细菌将硝酸盐转化为氮气实现脱氮。厌氧-缺氧-好氧工艺(Anaerobic-Anoxic-Oxic，AAO)是目前被广泛应用的城镇生活污水处理工艺。其中，硝化主要在好氧池中由硝化细菌完成，反硝化主要在缺氧池中由反硝化细菌完成。GB18918-2016城镇污水处理厂污染物排放标准颁布后，污水排放标准进一步提高，现有AAO工艺时常出现处理排放水不达标现象。因此，提高缺氧池污泥反硝化脱氮效率将是实现AAO工艺处理污水达标排放的重要途径。此外，传统反硝化理论认为，氧气存在条件下反硝化菌反硝化脱氮反应会受到抑制。针对以上，本发明提出高效兼性厌氧反硝化施氏假单胞菌QFPS及其在强化AAO工艺缺氧池污水脱氮中的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种反硝化施氏假单胞菌强化缺氧池污水脱氮方法，本发明的有益效果是反硝化菌QFPS反硝化脱氮效率受溶解氧水平影响小，缺氧培养条件下，菌株QFPS聚集成团，具有良好的沉降性能，能够有效避免应用过程中菌体流失，此外该菌株能够大幅度提高AAO工艺缺氧池污泥污水反硝化脱氮效率。
本发明所采用的技术方案是菌株QFPS分离自生活污水处理厂原水，取原水接到装有反硝化培养基的锥形瓶中富集驯化;取富集培养物转接到新鲜反硝化培养基继续富集驯化;取适量菌液稀释后涂布于含有LB培养基的LB固体平板上进行培养，待平板上长出单菌落，挑取单菌落分别接种到反硝化培养基中进行复筛;选取脱氮效率高的菌株;从平板上挑取菌株QFPS单菌落，接种于无菌液体LB培养基中培养至OD>0.8;取菌悬液离心,倒去上清液;菌沉淀用无菌生理盐水悬浮，离心,倒去上清液;菌沉淀用无菌生理盐水悬浮后接种于装有含有反硝化培养基的锥形瓶中。
进一步，菌株QFPS分离自生活污水处理厂原水，取10ml原水接到装有100mL反硝化培养基的250mL的锥形瓶中，20℃、180r/min富集驯化3d;取富集培养物10ml转接到新鲜反硝化培养基，20℃、180r/min继续富集驯化3d;取适量菌液稀释后涂布于含有LB培养基的LB固体平板上进行培养，待平板上长出单菌落，挑取单菌落分别接种到反硝化培养基中进行复筛;选取脱氮效率高的菌株;从平板上挑取菌株QFPS单菌落，接种于5ml无菌液体LB培养基中培养至OD>0.8;取2ml菌悬液以4000r/min离心5min,倒去上清液;菌沉淀用无菌0.9%生理盐水悬浮，4000r/min离心5min,倒去上清液;菌沉淀用无菌0.9%生理盐水悬浮后接种于装有含有100mL反硝化培养基的250mL的锥形瓶中。
进一步，LB培养基：酵母粉5份，蛋白胨5份，NaCl 10份，琼脂占总重量的1.5%，pH7.0。
进一步，反硝化培养基:丁二酸钠2份,NaNO3 2份,K2HPO4 0.5份，FeSO4·7H2O 0.1份，MnSO4·7H2O 0.05份，pH值7.0。以上培养基均在121℃下灭菌20min后使用。（发明人高配科;李瑜;贾传兴;赵峰;陈峻峰;丁宁;王仁君）