申请日2005.02.06
公开(公告)日2005.08.24
IPC分类号C12N1/20; C02F3/34; C02F3/02
摘要
本发明属于废水生物处理技术领域，具体为一种磺胺嘧啶废水高效处理菌株的简易筛选方法。本发明是一种通过把SD降解菌选择性培养基与细菌完全培养基交替/组合使用，特异性地筛选高效SD降解菌株的简易方法，所获得的SD降解菌株将用于SD废水好氧深井处理工艺的生物增强和生物激活技术。这种筛选方法的主要步骤包括先以选择性培养基进行初筛，再以完全培养基复壮，最后以选择性培养基验证。以选择性培养基进行初筛大大提高了筛选效率，以完全培养基复壮大大缩短了筛选周期，以选择性培养基验证则提高了筛选的准确性。
权利要求书
1.一种磺胺嘧啶废水好氧生物处理菌株的简易筛选方法，其特征是通过把选 择性培养基与细菌完全培养基交替/组合使用，特异性地筛选磺胺嘧啶降解菌株， 包括如下步骤：
1)在将接种源稀释后，先涂布于选择性培养基上，进行初筛;
2)把在选择性培养基上生长出来的单菌落转移到细菌完全培养基继续培养， 进行复壮;
3)将单菌落分离并在细菌完全培养基中纯化培养;
4)把菌株的纯培养再转接到选择性培养基上进行验证，验证其生长状态和降 解能力。
2.按照权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述接种源为磺胺嘧啶废 水深井曝气活性污泥。
3.按照权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：按重量份数计，所述选择 性培养基的组成为：磺胺嘧啶5.0～30.0份，琼脂20.0份，蒸馏水1000份。
4.按照权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：按重量份数计，所述选择 性培养基组成为：5.0～30.0份，酵母膏2.5g，蛋白胨2.5份，KH2PO42.0份，琼 脂20份，蒸馏水1000份。
5.按照权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：所述选择性培养基中的磺 胺嘧啶在灭菌后加入。
6.按照权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：按重量份数计，所述细菌 完全培养基为酵母膏蛋白胨培养基，其组成为：酵母膏5.0份，蛋白胨5.0份， KH2PO42.0份，琼脂20份，蒸馏水1000份。
说明书
一种磺胺嘧啶废水好氧生物处理菌株的简易筛选方法
技术领域
本发明属于废水生物处理技术领域，具体为一种磺胺嘧啶废水高效好氧生物 处理菌株的简易筛选方法。
背景技术
制药企业的高浓度废水—磺胺嘧啶废水(SD废水)是磺胺嘧啶化学合成生 产工艺中产生的废水。以某企业为例，其磺胺嘧啶废水日排放量为180吨左右， COD值为10000～20000mg/L。化学法合成磺胺嘧啶是以丙炔醇、二乙胺、活性 二氧化锰和磺胺脒为原料，通过氨氧化、环合、酸析等步骤形成磺胺嘧啶，总收 率为83.5%。SD废水的主要组成是磺胺嘧啶(化学名称为：N-2-嘧啶基-4-氨基苯 磺酰胺，英文名：Sulfadiazine，简称SD)，其次是磺胺脒(化学名称为：对氨基 苯磺酰氨基脒，简称SG)和醋酸盐。磺胺嘧啶和磺胺脒均是磺胺类抗生素，有 较强抑菌作用，同时，它们又具有难溶于水的化学特征。磺胺嘧啶废水的上述特 点使之成为制药企业废水处理中的一个难题。
目前，某企业主要以深井曝气工艺处理SD废水。由于废水主要成分的较强 抑菌作用、活性污泥活性逐年退化以及原有设备运行不稳定等因素，目前SD废 水的处理效率很低，多数情况下COD去除率尚不到50%，远远达不到设计标准 和当前需求。低效率的SD废水处理已经对企业的环保达标和资源节约形成很大 压力，所以企业迫切需求一种高效率、低成本、对现有工艺无重大改变的新的SD 废水处理技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一种磺胺嘧啶废水高效好氧生物处理菌株的简易筛选 方法，该方法是一种简捷、廉价、高效的SD降解菌株筛选方法，所获得的SD 降解菌株将用于SD废水好氧深井处理工艺的生物增强和生物激活技术。
本发明的技术方案是：
一种磺胺嘧啶废水好氧生物处理菌株的简易筛选方法，通过把选择性培养基 与细菌完全培养基交替/组合使用，特异性地筛选磺胺嘧啶降解菌株，包括如下步 骤：
1)在将接种源稀释后，先涂布于选择性培养基上，进行初筛;
2)把在选择性培养基上生长出来的单菌落转移到细菌完全培养基继续培养， 进行复壮;
3)挑取步骤2)中完全培养基上的单菌落，在细菌完全培养基上进行纯化培 养;
4)把菌株的纯培养再转接到选择性培养基上进行验证，观察并验证其生长状 态和降解能力。
所述接种源为磺胺嘧啶废水深井曝气活性污泥。
按重量份数计，所述选择性培养基的组成为：磺胺嘧啶5.0～30.0份，琼脂20.0 份，蒸馏水1000份。
按重量份数计，所述选择性培养基组成为：5.0～30.0份，酵母膏2.5g，蛋白 胨2.5份，KH2PO4 2.0份，琼脂20份，蒸馏水1000份。
所述选择性培养基中的磺胺嘧啶在灭菌后加入。
按重量份数计，所述细菌完全培养基为酵母膏蛋白胨培养基，其组成为：酵 母膏5.0份，蛋白胨5.0份，KH2PO4 2.0份，琼脂20份，蒸馏水1000份。
本发明的有益效果是：
1.本发明是一种通过把SD降解菌选择性培养基与细菌完全培养基交替/组 合使用，特异性地筛选高效SD降解菌株的简易方法，所获得的SD降解菌株将 应用于SD废水好氧深井处理工艺的生物增强和生物激活技术。磺胺嘧啶废水 COD浓度高、主要成分磺胺嘧啶和磺胺脒有较强抑菌性、难以降解，磺胺嘧啶废 水的高效生物处理技术是制药企业废水处理中的一个难题。
2.本发明在充分利用原有深井曝气好氧生物处理技术及设备的前提下，从废 水生物处理技术的核心—特异性高效微生物菌群的菌种筛选、活性调控等出发， 采用生物增强技术和生物激活技术相结合的手段，来提高深井曝气生物处理系统 对难降解毒性物质SD和SG的降解效率，是达到提高单位容积负荷、提高总COD 去除率、降低平均处理费用的一条有效途径，并最终为降低企业生产成本、实现 清洁生产做出贡献。
具体实施方式
本发明是把SD降解菌选择性培养基与细菌完全培养基交替/组合使用，特异 性地筛选高效SD降解菌株，即先以选择性培养基进行初筛，再以完全培养基复 壮，最后以选择性培养基验证。以选择性培养基进行初筛大大提高了筛选效率， 以完全培养基复壮大大缩短了筛选周期，再以选择性培养基验证则提高了筛选的 准确性。
SD降解菌选择性培养基以磺胺嘧啶为唯一碳源和氮源;普通的细菌完全培 养基即酵母膏蛋白胨培养基。这种简易筛选方法的主要步骤包括：
1)在将接种源稀释后，先涂布于选择性培养基上;
2)把在选择性培养基上生长出来的单菌落转移到普通的细菌完全培养基继续 培养;
3)将单菌落分离和纯化培养;
4)把菌株的纯培养再转接到选择性培养基上，验证其生长和降解能力。
所用培养基及其组成如下：
1号培养基(选择性培养基)：SD 10.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000ml(注： 灭菌后再加SD)。
2号培养基(组合型选择性培养基)：SD 10.0g，酵母膏2.5g，蛋白胨2.5g， KH2PO4 2.0g，琼脂20g，蒸馏水1000ml(注：灭菌后再加SD)。
3号培养基(细菌完全培养基)：酵母膏5.0g，蛋白胨5.0g，KH2PO4 2.0g， 琼脂20g，蒸馏水1000ml。
取接种源样品1g(SD废水深井曝气活性污泥)，稀释于经过灭菌的加玻璃珠 100ml生理盐水中，震荡20分钟后静置，取上层悬液1ml于9ml灭菌生理盐水 中(稀释倍数10-3)，以相同方法依次稀释至10-4、10-5、10-6、10-7倍。
从10-4、10-5、10-6倍不同稀释度的菌悬液中分别吸取0.2ml，涂布于1号和2 号固体培养基平皿上，每稀释度重复涂布6个平皿，置于37℃培养。
把在1号和2号选择性培养基上生长出来的单菌落转移到2号培养基继续培 养。把3号培养基上的单菌落分离和纯化培养，纯化培养再转接到1号培养基上， 验证其生长状态和对SD的降解能力。
通过本发明所提供的方法，从某制药企业的SD废水深井处理系统的好氧活 性污泥中筛选到6株具有较强SD降解能力的细菌菌株。将这些菌株投加到SD 废水好氧处理的小试装置中，在进水COD浓度为2000mg/L、水力停留时间24 小时的条件下，经过25天的比较运行，结果表明投加筛选出的高效降解菌株，可 使处理效率提高25%以上。