申请日2005.10.27
公开(公告)日2006.06.28
IPC分类号C12N7/02
摘要
本发明公开了一种污水中肠道病毒回收的方法，由如下步骤组成：(1)在污水中加入聚氯化铝或氯化铝，调pH为5.5～8.5，调温度为4℃～30℃;(2)通过过滤柱，所述过滤柱内的滤料为阳电荷滤材;(3)用6倍营养肉汤洗脱，收集洗脱液;(4)向洗脱液中加入分子量为6000的聚乙二醇，加入聚氯化铝或氯化铝，离心，弃上清液，加入生理盐水混悬沉淀，定容，本发明能使大体积水量和小体积的水量中病毒的回收率提高到80%以上。本发明涉及的工具原料来源广泛价格便宜;病毒的回收率高，且具有污水处理量较大，效果稳定的优点。
权利要求书
1.一种污水中肠道病毒回收的方法，其特征是由如下步骤组成：
(1)在100mL污水中加入聚氯化铝或氯化铝，使污水中的铝离子含量达到20mg/L～40mg/L， 混匀，调pH为5.5～8.5，调温度为4℃～30℃;
(2)通过过滤柱，所述过滤柱内的滤料为阳电荷滤材;
(3)用1～2倍滤料体积的6倍营养肉汤反复2～3次洗脱，再用1/10-1/8倍滤料体积的 6倍营养肉汤洗脱，收集洗脱液;
(4)向洗脱液中加入1/10-1/8倍洗脱液体积的分子量为6000的聚乙二醇，加入聚氯化铝 或氯化铝，使质量浓度为0.001%～0.2%，3000r/min～10000r/min离心20min～40min， 弃上清液，加入生理盐水10～40mL混悬沉淀，定容。
2.根据权利要求1所述的一种污水中肠道病毒回收的方法，其特征是所述100mL污水 中加入聚氯化铝或氯化铝后，使污水中的铝离子含量达到30mg/L。
3.根据权利要求1所述的一种污水中肠道病毒回收的方法，其特征是所述pH为6.5。
4.根据权利要求1所述的一种污水中肠道病毒回收的方法，其特征是所述温度为20 ℃～30℃。
5.根据权利要求1所述的一种污水中肠道病毒回收的方法，其特征是所述步骤(4) 中的加入聚氯化铝或氯化铝后，使质量浓度为0.004%，所述离心的转速为6000r/min，所 述离心时间为30min。
说明书
污水中肠道病毒回收的方法
技术领域
本发明涉及一种污水中病毒的回收方法，特别是涉及一种污水中肠道病毒回收的方法。
背景技术
环境中存在的各种致病病毒对人类的健康造成了极大的危害。目前人们已经证实城市 污水，尤其是生活污水中含有大量的致病的肠道病毒，包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、 埃可病毒、轮状病毒、甲型肝炎病毒等。Lancet杂志也撰文指出，在人的粪便及生活污水 中可以检出100余种肠道病毒，含量可在5×105pfu/L以上。这些病毒以水为媒介，导致传 染病的暴发流行。若能对一些环境水体(如河水、生活污水、工业废水)中的致病病毒进行 高效快速的检测与监控，会对病原体的隔绝、阻断其传播起到非常积极的作用。同时，富集 和检测水环境中的致病病毒，对于传染性疾病监控、流行病学研究、病原体分离鉴定等都有 很重要的意义。
水中病毒种类众多，目前还没有一种敏感的细胞系能同时分离鉴定出水中的多种病毒， 目前研究最多的是Polio病毒，也多把它作为肠道病毒的代表。但本实验考虑到Polio病 毒检测周期长(5到7天左右)，而f2噬菌体与人类肠道病毒在组成结构、形态大小及水 环境的存活情况相似，且检测技术简单快速，现在多用它作为肠道病毒的指示物，因此本 发明实施过程中先用f2作指示微生物对实验条件的进行优化摸索，最后再用Polio病毒进 行验证。
目前国内外研究浓集水中病毒的技术很多，主要有五种常见的方法：1)吸附法，它是 目前最常用的方法，让病毒吸附在滤膜材料或固体颗粒的表面，然后通过洗脱回收病毒;2) 超滤、反渗透和脱水透析法，它是让待浓集水样通过滤膜、反渗透膜或透析膜，水通过而 把病毒截留浓缩;3)絮凝沉淀法，它是向水中加入化学物质，形成絮凝沉淀，病毒通过与沉 淀结合而浓缩;4)免疫捕获法，它是把水样通过结合有高特异性纯化抗体的多糖凝胶柱， 抗体选择性地和病毒抗原结合，从而浓集病毒;5)电阻拦法，电阻拦效应是由原苏联学者 罗特米斯特罗夫等在研究微生物胶体悬浮液的行为时发现。当含微生物的液体流经垂直电 场内的填充层时，被极化了的填充料阻拦了微生物以及可形成真溶液的物质(如核酸、蛋白 质、甚至分子量比较低的有机物)，而让水通过，从而浓集了病毒。这些方法都有它们的优 点，但是针对浓集城市污水中的病毒却存在不少问题，主要有：病毒回收率低(大多数低于 60%)，效果不稳定;易受水质条件影响，尤其是污水浊度的限制;可处理的水样量太小(絮 凝沉淀法处理污水量一般小于1升)，无实际应用价值;在回收病毒同时，也将污水中对组 织细胞培养有毒性的物质浓集，导致假阳性结果;操作复杂，成本较高。
本发明延续发展本实验室建立的采用阳电荷粒状滤材浓集饮用水、地表水中病毒的方 法，且又考虑到污水中有较多的阴电荷，它们极有可能与病毒竞争性吸附滤材上的阳电荷， 降低病毒的回收率，因此，本实验创造性地在污水中先加入适量的载阳电荷物质，以中和 污水中的阴电荷杂质，考虑到聚氯化铝的铝离子为3+阳离子，能有效中和污水中的阴电荷， 提高病毒的回收率;且它还是较好的絮凝剂，能加大病毒之间的聚集，增加病毒与滤材阳 电荷接触机会，能提高病毒的回收率，因此选聚氯化铝或氯化铝作为本发明的载阳电荷物 质。
发明内容
本发明的目的是克服现有污水中病毒回收技术的不足，提供一种高回收率的污水中肠 道病毒回收的方法，本发明的技术方案如下：
一种污水中肠道病毒回收的方法，由如下步骤组成：
(1)在100mL污水中加入聚氯化铝或氯化铝，使污水中的铝离子含量达到20mg/L～40mg/L， 优选的是30mg/L，混匀，调pH为5.5～8.5，优选的是pH为6.5，调温度为4℃～30℃， 优选的是20℃～30℃;
(2)通过过滤柱，所述过滤柱内的滤料为阳电荷滤材;
(3)用1～2倍滤料体积的6倍营养肉汤反复2～3次洗脱，再用1/10～1/8倍滤料体积的 6倍营养肉汤洗脱，收集洗脱液;
(4)向洗脱液中加入1/10～1/8倍洗脱液体积的分子量为6000的聚乙二醇，加入聚氯化 铝或氯化铝，使质量浓度为0.001%～0.2%，优选的是0.004%，3000r/min～10000r/min 优选的是6000r/min，离心20～40min，优选的是30min，弃上清液，加入生理盐水10～40mL 混悬沉淀，定容。
本发明污水中肠道病毒回收的方法，通过在污水中先加入适量的载阳电荷物质聚氯化 铝或氯化铝，以中和污水中的阴电荷杂质，然后通过阳电荷滤材吸附、洗脱浓集病毒，提 高病毒的回收率。该发明具有病毒回收率高、操作简单、处理污水量大、成本低、且效果 稳定的优点。因此，在污水中病毒浓集技术中有广阔的应用前景。