申请日2011.12.14
公开(公告)日2012.07.11
IPC分类号C12N1/20; C12R1/38; C02F3/02; C02F3/34
摘要
本发明公开了低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌及分离培养方法，低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌(Pseudomonas sp.)亚黄-1 CGMCC No.5286，其具有在低温好氧条件下去除污水中氨氮的能力。实验结果表明：尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌(Pseudomonas sp.)亚黄-1 CGMCC No.5286在低温下，特别是在8-12℃的条件下，对氨氮去除有明显的强化作用，氨氮去除率提高了10%，出水氨氮浓度最高为4.8mg/L，优于一级A的出水标准(水温≤12℃时，一级A标准的控制指标为8mg/L)。
权利要求书
1.一种低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌(Pseudomonas sp.)亚黄-1 CGMCC No.5286， 其具有在低温好氧条件下去除污水中氨氮的能力。
2.权利要求1的一种低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌(Pseudomonas sp.)亚黄-1 CGMCC No.5286在低温好氧条件下去除污水中氨氮的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征是所述低温为8-12℃。
4.权利要求1的低温下去除污水中氨氮的假单胞菌的分离培养方法，其特征是包括如下步骤：
(1)将第一种亚硝酸细菌培养液放入小试SBR反应器中，将污水处理厂污泥接种所述第一 种亚硝酸细菌培养液中，在8～12℃，连续培养4-6天，取出上清液，加入第二种亚硝酸细菌 培养液，在8～12℃，连续培养4-6天，取出上清液，加入第三种亚硝酸细菌培养液，在8～ 12℃，连续培养4-6天，富集、驯化低温细菌;
(2)取10mL步骤(1)获得的污泥，加入已装有90mL灭菌蒸馏水和20～30粒灭菌玻璃 珠的250mL锥形瓶中，振荡10～30min，使细菌细胞充分释放到上清液中;静置20～40min， 取1mL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10-2的菌悬液，按上述方法依次做 系列稀释，一直做到10-8为止;
(3)选取梯度为10-5～10-8的菌悬液，分别取1mL接种于亚硝酸细菌固体培养基，每个稀释 度做3个平行样，编号;10℃在有氧的条件下保湿培养2～3周;
(4)从步骤(3)中的亚硝酸细菌固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在亚 硝酸细菌固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3-4次，使平板上的菌落在显 微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为亚黄-1，经鉴定为低温条件下去除 污水中氨氮的假单胞菌(Pseudomonas sp.)。
5.根据权利要求4所述的低温下去除污水中氨氮的假单胞菌的分离培养方法，其特征是所述 第一种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成：NH4Cl 0.0764g、乙酸钠2g、MgSO47H2O 0.05g、 K2HPO40.2g、NaCl 0.12g、MnSO4H2O 0.01g、FeSO40.01g，加蒸馏水至1000mL。
6.根据权利要求4所述的低温下去除污水中氨氮的假单胞菌的分离培养方法，其特征是所述 第二种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成：NH4Cl 0.191g、乙酸钠2g、MgSO47H2O 0.05g、 K2HPO40.2g、NaCl 0.12g、MnSO4H2O 0.01g、FeSO40.01g，加蒸馏水至1000mL。
7.根据权利要求4所述的低温下去除污水中氨氮的假单胞菌的分离培养方法，其特征是所述 第三种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成：NH4Cl 0.382g、乙酸钠2g、MgSO47H2O 0.05g、 K2HPO40.2g、NaCl 0.12g、MnSO4H2O 0.01g、FeSO40.01g，加蒸馏水至1000mL。
8.根据权利要求4所述的低温下去除污水中氨氮的假单胞菌的分离培养方法，其特征是所述 亚硝酸细菌固体培养基由下述组分组成：NH4Cl 0.0764g、乙酸钠2g、MgSO47H2O 0.05g、 K2HPO40.2g、NaCl 0.12g、MnSO4H2O 0.01g、FeSO40.01g、琼脂20g，加蒸馏水至1000mL。
说明书
低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌及分离培养方法
技术领域
本发明属于污水处理领域，涉及一株具有低温下去除污水中氨氮的假单胞菌及分离培养 方法。
背景技术
低温对生物处理能力产生重大影响的原因是由于温度的降低影响了微生物的生长及代谢 并使污水处理系统中微生物群系发生了改变。在温度下降过程中，中温菌的代谢活性逐渐下 降，到一定温度时便失去活性，而适于低温环境的低温微生物的数量由于自身的生理特性及 各种生态因子的抑制作用，在数量上无法达到优势菌群的地位，从而导致污水处理厂冬季出 水水质下降。因此亟需一种能在低温好氧条件下去除污水中氨氮的菌株。
发明内容
本发明的目的是克服现有菌株低温脱氨氮效果不佳的不足，提供一种在低温条件下能去 除污水中氨氮的假单胞菌。
本发明的第二个目的是提供一种低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌的分离培养方 法。
本发明的第三个目的是提供一种低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌的用途。
本发明的技术方案概述如下：
一种低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌(Pseudomonas sp.)亚黄-1 CGMCC No.5286， 其具有在低温好氧条件下去除污水中氨氮的能力。
一种低温条件下去除污水中氨氮的假单胞菌(Pseudomonas sp.)亚黄-1 CGMCC No.5286 在低温好氧条件下去除污水中氨氮的用途。
低温优选为8-12℃。
低温下去除污水中氨氮的假单胞菌的分离培养方法，包括如下步骤：
(1)将第一种亚硝酸细菌培养液放入小试SBR反应器中，将污水处理厂污泥接种所述第一 种亚硝酸细菌培养液中，在8～12℃，连续培养4～6天，取出上清液，加入第二种亚硝酸细 菌培养液，在8～12℃，连续培养4～6天，取出上清液，加入第三种亚硝酸细菌培养液，在 8～12℃，连续培养4～6天，富集、驯化低温细菌;
(2)取10mL步骤(1)获得的污泥，加入已装有90mL灭菌蒸馏水和20～30粒灭菌玻璃 珠的250mL锥形瓶中，振荡10～30min，使细菌细胞充分释放到上清液中;静置20～40min， 取1mL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10-2的菌悬液，按上述方法依次做 系列稀释，一直做到10-8为止;
(3)选取梯度为10-5～10-8的菌悬液，分别取1mL接种于亚硝酸细菌固体培养基，每个稀释 度做3个平行样，编号;10℃在有氧的条件下保湿培养2～3周;
(4)从步骤(3)中的亚硝酸细菌固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在亚 硝酸细菌固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3-4次，使平板上的菌落在显 微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为亚黄-1，经鉴定为低温条件下去除 污水中氨氮的假单胞菌(Pseudomonas sp.)。
所述第一种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成：NH4Cl 0.0764g、乙酸钠2g、MgSO47H2O 0.05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0.12g、MnSO4H2O 0.01g、FeSO4 0.01g，加蒸馏水至1000mL。
所述第二种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成：NH4Cl 0.191g、乙酸钠2g、MgSO47H2O 0.05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0.12g、MnSO4H2O 0.01g、FeSO4 0.01g，加蒸馏水至1000mL。
所述第三种亚硝酸细菌培养液由下述组分组成：NH4Cl 0.382g、乙酸钠2g、MgSO47H2O 0.05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0.12g、MnSO4H2O 0.01g、FeSO4 0.01g，加蒸馏水至1000mL。
所述亚硝酸细菌固体培养基由下述组分组成：NH4Cl 0.0764g、乙酸钠2g、MgSO47H2O 0.05g、K2HPO4 0.2g、NaCl 0.12g、MnSO4H2O 0.01g、FeSO4 0.01g、琼脂20g，加蒸馏水至 1000mL。
实验结果表明：尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种低温条件下去除污水 中氨氮的假单胞菌(Pseudomonas sp.)亚黄-1 CGMCC No.5286在低温下，特别是在8-12℃ 的条件下，对氨氮去除有明显的强化作用，氨氮去除率提高了10%，出水氨氮浓度最高为 4.8mg/L，优于一级A的出水标准(水温≤12℃时，一级A标准的控制指标为8mg/L)。