申请日2015.06.17
公开(公告)日2015.12.02
IPC分类号C12N1/20; C02F101/38; C12R1/38; C02F3/34
摘要
一株高效阿特拉津降解菌及其筛选方法以及在农田废水中阿特拉津的生物降解的应用，属于环境微生物技术领域，其菌株(Pseudomonas?sp.?ZXY-1)是从吉林化工有限公司农药厂受污染土壤中分离得到，该菌株可以以阿特拉津作为唯一氮源生长，其具有高效降解阿特拉津的能力，10.5小时阿特拉津降解率即可达99%。菌株Pseudomonas?sp.?ZXY-1的最适生长温度为25-35℃，最适生长pH为7.0，最适生长摇床转速为150r/min。该菌种适用于农田废水阿特拉津的生物降解与生物修复。
权利要求书
1.一株高效阿特拉津降解菌，其特征在于所述菌株为Pseudomonassp.ZXY-1，于2015年6月1日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCCNo.10936。
2.根据权利要求1所述的高效阿特拉津降解菌，其特征在于可应用于农田废水中阿特拉津的生物降解及生物修复。
说明书
一株高效阿特拉津降解菌及其筛选方法以及在农田废水中阿特拉津的生物降解的应用
技术领域
本发明属于环境微生物技术领域，涉及菌株Pseudomonassp.ZXY-1及其在农田废水中阿特拉津的生物降解，可用于农药污染的原位修复。
背景技术
近些年，中国的农业得到了持续快速的发展。随之，农药的使用量逐年增加。在农业生产中，除草剂是一类重要的农药。在不同的除草剂中，阿特拉津因其除草性能好、使用成本低廉等优点得到了广泛的使用。然而，由于缺乏有效的处理技术，绝大部分阿特拉津在使用过后，会随着降雨径流及农田退水等途径直接进入自然水体，从而造成严重的水体污染。因此，为了保证水资源的可持续发展，我们需要开发出可高效降解阿特拉津的处理技术。
处理阿特拉津的主要技术为生物降解法。其中，利用微生物降解阿特拉津因成本低、无二次污染等优点具有广泛的发展前景。在微生物降解法的发展中，不仅要筛选出能够以阿特拉津为单一底物的细菌，更重要的是所筛选的细菌可直接用于处理含有阿特拉津的实际废水。因此，筛选出高效的阿特拉津降解菌并将其应用于实际废水中，将其转化为无毒无害或低毒低害的物质有着重要的意义。
发明内容
本发明目的在于在从自然界筛选出高效高产量的阿特拉津降解菌，并将其应用于含有阿特拉津的农田废水中，为实际农田废水中阿特拉津的去除奠定理论基础。
本发明中一株高效的阿特拉津降解菌，其特征在于为Pseudomonassp.ZXY-1，2015年6月1日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCCNo.10936，北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
该菌株为革兰氏阴性菌，单个细菌呈杆状，无芽孢，菌体长为2.27μm，宽为799.76nm;菌株在无机盐固定培养基上生长，菌落呈乳白色略带淡黄色，圆形，不透明，表面光滑略微隆起。该菌株最适生长温度为25-35℃，最适pH为7.0，最适生长摇床转速为150r/min。
本发明中一株高效的阿特拉津降解菌Pseudomonassp.ZXY-1是从吉林化工有限公司农药厂受污染土壤中分离得到，设定温度为30℃，pH7.0筛选，具体筛选步骤如下：
(1)取10g农药厂受污染土壤样品加入100ml含有100mg/L阿特拉津的无机盐培养基三角瓶中，设定转速为150r/min，摇床培养7天，获得富集菌液。
(2)取10ml富集菌液加入100ml含有100mg/L阿特拉津的无机盐培养基三角瓶中，重复此步骤3次。将富集后的菌液进行平板涂布，恒温培养箱培养3天后获得单菌落。
(3)挑取步骤(2)中的单菌落进行平板三区划线，重复此步骤3次直至平板上出现形态大小相同的单菌落，即细菌纯化完成。
(4)将纯菌接入斜面培养基培养3天，4℃保存。
其中，无机盐培养基为：0.9gKH2PO4，6.5gNa2HPO4.12H2O，3g蔗糖，0.2gMgSO4.7H2O，0.01gFeSO4.7H2O，以及1ml微量元素液溶于1000ml蒸馏水中。无机盐固体培养基是在无机盐的成分中另加入琼脂18g/L。
斜面培养基为：0.9gKH2PO4，6.5gNa2HPO4.12H2O，3g蔗糖，1g蛋白胨，0.5g酵母粉，1gNaCl，0.2gMgSO4.7H2O，0.01gFeSO4.7H2O，1ml微量元素液以及18g琼脂溶于1000ml蒸馏水中。
微量元素液为：0.1gCoCl2.6H2O，0.425gMnCl2.4H2O，0.05gZnCl2，0.01gNiCl2.6H2O，0.015gCuSO4.5H2O，0.01gNa2MoO4.2H2O，0.01gNa2SeO4.2H2O溶于1000ml蒸馏水中。
本发明中一株高效阿特拉津降解菌为假单胞菌属(Pseudomonassp.)，经过16SrDNA序列测序，其结果通过Blast程序进行同源性比较，该菌株与Pseudomonasalcaliphila的同源性达99%。
本发明中一株高效阿特拉津降解菌应用于含有不同浓度阿特拉津农田废水的生物处理。