申请日2006.09.21
公开(公告)日2010.03.24
IPC分类号C12N1/00
摘要
污水处理工程菌菌株的筛选方法及筛选用培养基，它涉及菌株的筛选方法及筛选用培养基。它解决了目前污水处理工程菌菌株的筛选方法分离得到的微生物种类少，很多水处理性能优异的菌株流失的问题。筛选用培养基包括液体和固体两种筛选用培养基。工程菌菌株的筛选：(一)取活性污泥;(二)配制筛选用培养基;(三)富集和驯化;(四)经富集和驯化的培养液与灭菌水混合后梯度稀释，再均匀涂布于固体筛选培养基上;(五)挑菌落数为30～50个的平皿继续培养;(六)菌株分离、纯化;(七)菌株性能检测，挑选性能优异的菌株。在同样待处理污水中本发明分离纯化得到的菌株种类数量是目前其它筛选方法的3～4倍，可筛选出目前筛选不到的污水处理性能优异的菌株。
権利要求書
1、污水处理工程菌菌株筛选用培养基，其特征在于污水处理工程菌菌株 筛选用培养基包括液体筛选培养基和固体筛选培养基两种;每1000mL液体筛 选培养基由0.4～0.6g蛋白胨、0.05～0.15g酵母、1～2gK2HPO4、 0.25～0.75gKH2PO4、0.3～0.5gNH4NO3、0.1～0.3gMgSO4·7H2O、100～995mL经 112～130℃灭菌10～30min的待处理污水和余量的蒸馏水制成;每1000mL固体 筛选培养基由0.4～0.6g蛋白胨、0.05～0.15g酵母、1～2gK2HPO4、 0.25～0.75gKH2PO4、0.3～0.5gNH4NO3、0.1～0.3gMgSO4·7H2O、14～16g琼脂、 100～980mL经112～130℃灭菌10～30min的待处理污水和余量的蒸馏水制成。
2、根据权利要求1所述的污水处理工程菌菌株筛选用培养基，其特征在 于污水处理工程菌菌株筛选用培养基包括液体筛选培养基和固体筛选培养基 两种;每1000mL液体筛选培养基由0.5g蛋白胨、0.1g酵母、1.5gK2HPO4、 0.5gKH2PO4、0.4gNH4NO3、0.2gMgSO4·7H2O、120～970mL经115～128℃灭菌 12～28min的待处理污水和余量的蒸馏水制成;每1000mL固体筛选培养基由 0.5g蛋白胨、0.1g酵母、1.5gK2HPO4、0.5gKH2PO4、0.4gNH4NO3、0.2 gMgSO4·7H2O、15g琼脂、120～960mL经115～128℃灭菌12～28min的待处理 污水和余量的蒸馏水制成。
3、根据权利要求1或2所述的污水处理工程菌菌株筛选用培养基，其特 征在于每1000mL液体筛选培养基中加入经118～125℃灭菌15～25min的待处 理污水150～950mL。
4、根据权利要求1或2所述的污水处理工程菌菌株筛选用培养基，其特 征在于每1000mL液体筛选培养基中加入经121℃灭菌20min的待处理污水 300～500mL。
5、根据权利要求1或2所述的污水处理工程菌菌株筛选用培养基，其特 征在于每1000mL固体筛选培养基中加入经118～125℃灭菌15～25min的待处 理污水150～940mL。
6、根据权利要求1或2所述的污水处理工程菌菌株筛选用培养基，其特 征在于每1000mL固体筛选培养基中加入经121℃灭菌20min的待处理污水 300～500mL。
7、污水处理工程菌菌株的筛选方法，其特征在于污水处理工程菌菌株的 筛选方法按以下步骤进行：(一)待处理污水静置，弃去上清液取沉淀活性污 泥;(二)配制如权利要求1所述的污水处理工程菌菌株筛选用培养基;(三) 菌株的富集和驯化培养：将活性污泥接种于液体筛选培养基，之后在30±0.5 ℃、120r/min的条件下振荡培养24～48h，然后按4%～6%的接种量抽取振荡培 养液加入到新鲜液体筛选培养基中在3040.5℃、120r/min的条件下继续振荡培 养24～48h;(四)将经富集和驯化的培养液与灭菌水按1∶10的体积比混合， 之后梯度稀释，再将梯度稀释液均匀涂布于固体筛选培养基上在30±0.5℃的条 件下倒置培养2～3天;(五)挑选菌落数为30～50个的平皿置于室温条件下继 续培养2～3天;(六)菌株分离、纯化;(七)菌株性能检测，选取污水处理性 能优异的菌株制备污水处理工程菌。
8、根据权利要求7所述的污水处理工程菌菌株的筛选方法，其特征在于 步骤(四)中梯度稀释的倍数为105～108倍。
9、根据权利要求7所述的污水处理工程菌菌株的筛选方法，其特征在于 步骤(七)中对分离纯化的菌株进行絮凝率、脱酚率和COD去除率检测。
10、根据权利要求9所述的污水处理工程菌菌株的筛选方法，其特征在于 絮凝率检测：将菌株接种到絮凝培养基中在30±0.5℃、120r/min的条件下振荡 培养16h，再观察是否有絮凝体出现;其中絮凝培养基每1000mL由1.2g葡萄 糖、0.6g蛋白胨、0.1gK2HPO4、0.05g KH2PO4、0.1g MgSO4和余量的蒸馏水 制成，并调节pH值为7.0。
说明书
污水处理工程菌菌株的筛选方法及筛选用培养基
技术领域
本发明涉及菌株的筛选方法及筛选用培养基。
背景技术
固定化微生物技术在水处理领域广泛的被应用，固定化微生物技术中工程 菌菌株自身的水处理性能对最终的污水处理效果影响巨大。但是目前污水处理 工程菌菌株的筛选方法都是采用LB培养基富集，分离细菌，而能在LB培养 基上生长繁殖的微生物只占总菌群很小的一部分，所以很多污水处理性能优异 的菌株流失以至筛选失败。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前污水处理工程菌菌株的筛选方法分离得到 的微生物种类少，很多水处理性能优异的菌株流失的问题，而提供的一种污水 处理工程菌菌株的筛选方法及筛选用培养基。污水处理工程菌菌株筛选用培养 基包括液体筛选培养基和固体筛选培养基两种;每1000mL液体筛选培养基由 0.4～0.6g蛋白胨、0.05～0.15g酵母、1～2gK2HPO4、0.25～0.75gKH2PO4、 0.3～0.5gNH4NO3、0.1～0.3gMgSO4·7H2O、100～995mL经112～130℃灭菌 10～30min的待处理污水和余量的蒸馏水制成;每1000mL固体筛选培养基由 0.4～0.6g蛋白胨、0.05～0.15g酵母、1～2gK2HPO4、0.25～0.75gKH2PO4、 0.3～0.5gNH4NO3、0.1～0.3gMgSO4·7H2O、14～16g琼脂、100～980mL经112～130 ℃灭菌10～30min的待处理污水和余量的蒸馏水制成。污水处理工程菌菌株的 筛选方法按以下步骤进行：(一)待处理污水静置，弃去上清液取沉淀活性污 泥;(二)配制如上所述的污水处理工程菌菌株筛选用培养基;(三)菌株的富 集和驯化培养：将活性污泥接种于液体筛选培养基，之后在30±0.5℃、120r/min 的条件下振荡培养24～48h，然后按4%～6%的接种量抽取振荡培养液加入到新 鲜液体筛选培养基中在30±0.5℃、120r/min的条件下继续振荡培养24～48h; (四)将经富集和驯化的培养液与灭菌水按1∶10的体积比混合，之后梯度稀 释，再将梯度稀释液均匀涂布于固体筛选培养基上在30±0.5℃的条件下倒置培 养2～3天;(五)挑选菌落数为30～50个的平皿置于室温条件下继续培养2～3 天;(六)菌株分离、纯化;(七)菌株性能检测，选取污水处理性能优异的菌 株制备污水处理工程菌。在同样待处理污水中本发明分离纯化得到的菌株种类 数量是目前其它筛选方法的3～4倍，可筛选出多株目前筛选方法无法分离得到 的污水处理性能优异的菌株。