申请日2015.01.16
公开(公告)日2018.04.06
IPC分类号C07K1/14
摘要
本发明公开了一种好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，包括如下步骤：(1)好氧颗粒污泥用去离子水清洗后离心;(2)将离心后的好氧颗粒污泥用液氮研磨;(3)调节研磨后好氧颗粒污泥的pH值为11‑14;(4)对调节pH后的好氧颗粒污泥消解，消解温度45‑55℃，消解时间9‑12h;(5)对消解后的好氧颗粒污泥离心，取上清液，得到好氧颗粒污泥总蛋白。本发明优点为能较为完整稳定地提取出好氧颗粒污泥的总蛋白，SDS‑PAGE跑出的条带清晰;可以消除好氧颗粒污泥中物质对蛋白提取的干扰，提取蛋白纯度高;提取的总蛋白稳定，分子量小的蛋白也不易降解;方法操作简单，具有效率高、经济、简洁的优点，适于蛋白的快速提取。
权利要求书
1.一种好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)好氧颗粒污泥用去离子水清洗后离心;
(2)将离心后的好氧颗粒污泥用液氮研磨;
(3)调节研磨后好氧颗粒污泥的pH值为12.3-12.5;
(4)对调节pH后的好氧颗粒污泥进行消解，消解温度为50-51℃，消解时间控制在10-11h;
(5)对消解后的好氧颗粒污泥离心，取上清液，得到好氧颗粒污泥总蛋白。
2.根据权利要求1所述的好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，其特征在于：步骤(1)中，清洗、离心后所述好氧颗粒污泥的含水率保持在80-90%。
3.根据权利要求2所述的好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，其特征在于：清洗、离心后所述好氧颗粒污泥的含水率保持在88-90%。
4.根据权利要求1所述的好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，其特征在于：步骤(3)中，使用NaOH调节所述好氧颗粒污泥的pH值。
5.根据权利要求1所述的好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，其特征在于：步骤(3)中，调节pH值前，先向好氧颗粒污泥中加入去离子水，其中，好氧颗粒污泥与去离子水的重量比为1:3.5-4。
6.根据权利要求1所述的好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，其特征在于：步骤(5)中，所述离心转速为3500-3700r/min，时间为10-20min。
说明书
一种好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法
技术领域
本发明涉及一种蛋白的提取方法，具体涉及一种好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，属于生物化工技术领域。
背景技术
好氧颗粒污泥一般呈球形或椭球形，颗粒表面平滑清晰，结构规则致密，具有较大的物理强度和较快的沉降速率，在沉淀或泥水混合物中可以看到单独的个体，抗有机负荷能力强，可实现同步脱氮除磷，使生化过程高效稳定进行。同时，好氧颗粒污泥包含多种好氧、兼性、厌氧微生物，组成一个完整的微生物群落。由于好氧颗粒污泥微生物种类繁多，所以探索一种好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法有重要的理论和实践意义。
目前关于蛋白提取的方法主要有酸解法、碱解法、超声波法等，但这些方法大部分针对于活性污泥，而目前专门针对于好氧颗粒污泥蛋白的提取方法鲜有报道。活性污泥为絮状结构，其污泥微生物特征与好氧颗粒污泥有很大的不同，蛋白提取方法也存在较大的差异。目前利用碱解法提取好氧颗粒污泥总蛋白很少，碱解法提取好氧颗粒污泥总蛋白的最佳工艺条件也无从考究。
发明内容
发明目的：本发明的目的是提供一种好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，该方法提取的好氧颗粒污泥总蛋白纯度较高、蛋白稳定，同时小分子量蛋白不易降解。
技术方案：本发明所述好氧颗粒污泥总蛋白的提取方法，包括如下步骤：
(1)好氧颗粒污泥用去离子水清洗后离心;
(2)将离心后的好氧颗粒污泥用液氮研磨;
(3)调节研磨后好氧颗粒污泥的pH值为11-14;
(4)对调节pH后的好氧颗粒污泥进行消解，消解温度为45-55℃，消解时间控制在9-12h;
(5)对消解后的好氧颗粒污泥离心，取上清液，得到好氧颗粒污泥总蛋白。
其中，在步骤(1)中，清洗、离心后所述好氧颗粒污泥的含水率保持在80-90%，进一步优选为88-90%。
步骤(3)中，调节研磨后所述好氧颗粒污泥的pH值优选为12.3-12.5。同时，使用NaOH等调节所述好氧颗粒污泥的pH值。另外，在调节pH值前，先向好氧颗粒污泥中加入去离子水，其中，好氧颗粒污泥与去离子水的重量比为1:3.5-4。
步骤(4)中，消解温度优选为50-51℃。消解时间优选为10-11h。
步骤(5)中，所述离心转速为3500-3700r/min，时间为10-20min。
有益效果：本发明与现有技术相比，其显著优点为：利用本发明方法能较为完整稳定地提取出好氧颗粒污泥的总蛋白，SDS-PAGE跑出的条带清晰;本发明方法可以消除好氧颗粒污泥中物质对蛋白提取的干扰，提取蛋白纯度高;本发明方法提取的总蛋白稳定，分子量小的蛋白也不易降解;本发明方法操作简单，具有效率高、经济、简洁的优点，适于蛋白的快速提取。