申请日2015.03.15
公开(公告)日2015.07.15
IPC分类号C12N1/20; C12R1/01; C02F3/34
摘要
本发明公开了一种油性漆废水降解菌及其筛选富集方法，属于微生物筛选技术领域。该方法包括如下步骤：(1)制备菌液;(2)制备油性漆废水降解菌系;(3)筛选油性漆废水降解菌系;(4)对纯化的降解菌进行复筛;其中步骤(2)是在步骤(1)的菌液中加入葡萄糖，再加入油性漆酸废水，将其接入到无机盐培养基中，摇床避光传代培养，每次传代培养时培养基中葡萄糖的量均比上一代减少，油性漆废水的量均比上一代增加，每次传代培养7d，传代培养在五代以上，最后一代培养时培养基中不添加葡萄糖。本发明采用生物法处理油性漆废水，具有能耗低、反应条件温和且效率较高，降解菌株对油性漆废水的降解效率可以达到80%以上。
权利要求书
1.一种油性漆废水降解菌，其特征在于：该菌株为微杆菌(microbacterium sp.) XR001，保藏起始日期为2014年12月23日，保藏编号为CGMCC No.10237。
2.权利要求1所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，其特征在于，包 括如下步骤：
(1)制备菌液：将汽车涂装废水排污口污泥加入无菌水中，汽车涂装废水 排污口污泥的浓度为0.08g/mL，摇床避光培养24h，得到菌悬液;在灭菌后的无 机盐培养基中接种菌悬液，菌悬液的接种量为无机盐培养基体积的5%，摇床避 光培养7d，得到菌液;
(2)制备油性漆废水降解菌系：将葡萄糖加入步骤(1)的菌液中，按菌 液体积的5%接种油性漆废水，摇床避光进行传代培养，得到油性漆废水降解菌 系培养液;每次传代培养时菌液中葡萄糖的量均比上一代减少1/5，油性漆废水 的量均比上一代增加，每次增加量为菌液体积的5%，每次传代培养7d，传代培 养≥五代，最后一代培养时培养基中不再添加葡萄糖;
(3)筛选油性漆废水降解菌系：往无机盐培养基中加入琼脂，灭菌后，待 无机盐培养基凝固后加入经梯度稀释的步骤(2)的油性漆废水降解菌系培养液 中并涂布均匀，30℃培养7d，挑取周围有透明圈的菌落，重复进行接种培养并 划线分离，得到纯化的油性漆废水降解菌系;
(4)对纯化的油性漆废水降解菌系进行复筛：将步骤(3)纯化的油性漆 废水降解菌系接种于LB培养基中，长出菌落后，制备成浓度为OD600=1的菌液， 备用。
3.根据权利要求2所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，其特征在于， 步骤(1)中所述的摇床避光条件为30℃、130r/min。
4.根据权利要求2所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，其特征在于， 步骤(2)中所述的油性漆废水的浓度为200mg/L;所述的葡萄糖的重量为无机 盐培养基重量的0.5%。
5.根据权利要求2所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，其特征在于， 步骤(2)中所述的摇床避光的条件为于30℃、130r/min培养7d。
6.根据权利要求2所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，其特征在于， 步骤(2)中所述的无机盐培养基的组分为：NaCl 0.5g，NH4NO30.4g，KH2PO41.0g， K2HPO41.0g，酵母浸粉0.2g，微量元素液4mL，蒸馏水1000mL，调pH值为 7.2;所述的微量元素液的组成为：MgSO42.0g，CuSO40.5g，MnSO40.5g， FeSO4·7H2O 0.5g，CaCl20.5g，蒸馏水500mL。
7.根据权利要求2所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，其特征在于， 步骤(3)中所述的琼脂的重量为无机盐培养基重量的2%;所述的无机盐培养 基与步骤(2)的油性漆废水降解菌系培养液的体积比为100:1。
8.根据权利要求2所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，其特征在于， 步骤(3)中所述的梯度稀释为将步骤(2)的油性漆废水降解菌系培养液按照 体积分别稀释103、104、105倍。
9.根据权利要求2所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，其特征在于， 步骤(4)中所述的LB平板培养基的组成为：蛋白胨2.5g，牛肉膏0.75g， NaCl1.25g，蒸馏水250mL。
说明书
一种油性漆废水降解菌及其筛选富集方法
技术领域
本发明属于微生物筛选技术领域，具体涉及一种油性漆废水降解菌及其筛 选富集方法。
背景技术
随着国内汽车工业蓬勃发展，汽车油漆的用量逐年增加，随之产生的油漆 废水也不容忽视。在汽车油漆喷涂过程中，手工喷涂至少有40%-60%的过喷漆 雾飞散，静电喷涂也会产生10%以上的过喷漆雾，过喷漆雾凝聚下沉通过车间 循环水排出产生油漆废水。而油性漆废水主要产生于汽车喷涂的前处理阶段， 据统计到2010年，我国汽车产量达1000万辆，汽车保有量达5200万辆，若按 生产每辆汽车产生油性漆废水0.5m3计算，每年要产生500万m3油性漆废水。 油性漆废水组分复杂、污染物浓度高、环境危害性强，这使得油性漆废水的处 理十分困难。
当前油性漆废水的处理方法主要有混凝沉淀法，通过投加絮凝剂使污染物 絮凝沉淀，然后经斜板沉淀池装置等进行去除，此法可以有效去除油性漆废水 中的油、高分子树脂等，但是不能从根本上降解污染物质;超滤膜法是在静压 差推动力的作用下，使得油性漆废水中的溶剂和小的溶质粒子从高压料液侧透 过具有选择透过性的高分子功能超滤膜到低压侧的滤液，此法可以明显降低油 性漆废水的浓度，但是操作繁琐、膜组件寿命不长、成本较高;微电解—化学 氧化法处理油性漆废水主要是在化学氧化剂的作用下，使油性漆废水中的有机 物进一步降解为稳定的对自然环境影响小的无机盐类，目前该技术已经投入工 业化，但是存在着填料易结块、填料更换困难、反应器容易堵塞等问题。利用 生物法处理油性漆废水具有能耗低、反应条件温和且效率较高，厌氧过程还可 以回收沼气，更加符合国家节能减排、可持续发展的战略路线。研究具有专属 适应性微生物的筛选驯化培养，对于提高生物反应系统的耐受性和稳定性，提 高降解效率具有重要意义。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术中存在的缺点与不足，提供一种油性 漆废水降解菌。
本发明的另一目的在于提供所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，该 方法有效的提高了油性漆废水的降解效率。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种油性漆废水降解菌，该菌株为 微杆菌(microbacterium sp.)XR001，保藏起始日期为2014年12月23日，保藏 编号为CGMCC No.10237;保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心(CGMCC);保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
所述的油性漆废水降解菌的筛选富集方法，包括如下步骤：
(1)制备菌液：将汽车涂装废水排污口污泥加入无菌水中，汽车涂装废水 排污口污泥的浓度为0.08g/mL，摇床避光培养24h，得到菌悬液;在灭菌后的无 机盐培养基中接种菌悬液，菌悬液的接种量为无机盐培养基体积的5%，摇床避 光培养7d，得到菌液;
(2)制备油性漆废水降解菌系：将葡萄糖加入步骤(1)的菌液中，按菌 液体积的5%接种油性漆废水，摇床避光进行传代培养，得到油性漆废水降解菌 系培养液;每次传代培养时菌液中葡萄糖的量均比上一代减少1/5，油性漆废水 的量均比上一代增加，每次增加量为菌液体积的5%，每次传代培养7d，传代培 养≥五代，最后一代培养时培养基中不再添加葡萄糖;
(3)筛选油性漆废水降解菌系：往无机盐培养基中加入琼脂，灭菌后，待 无机盐培养基凝固后加入经梯度稀释的步骤(2)的油性漆废水降解菌系培养液 中并涂布均匀，30℃培养7d，挑取周围有透明圈的菌落，重复进行接种培养并 划线分离，得到纯化的油性漆废水降解菌系;
(4)对纯化的油性漆废水降解菌系进行复筛：将步骤(3)纯化的油性漆 废水降解菌系接种于LB培养基中，长出菌落后，制备成浓度为OD600=1的菌液， 备用;
步骤(1)中，
所述的摇床避光条件为30℃、130r/min;
所述的无机盐培养基的组分为：NaCl 0.5g，NH4NO30.4g，KH2PO41.0g， K2HPO41.0g，酵母浸粉0.2g，微量元素液4mL，蒸馏水1000mL，调pH值为 7.2;
所述的微量元素液的组成为：MgSO42.0g，CuSO40.5g，MnSO40.5g， FeSO4·7H2O 0.5g，CaCl20.5g，蒸馏水500mL。
步骤(2)中，
所述的油性漆废水的浓度为200mg/L;所述的葡萄糖的重量为无机盐培养基 重量的0.5%;
所述的摇床避光的条件为于30℃、130r/min培养7天;
所述的无机盐培养基的组分为：NaCl 0.5g，NH4NO30.4g，KH2PO41.0g， K2HPO41.0g，酵母浸粉0.2g，微量元素液4mL，蒸馏水1000mL，调pH值为 7.2;
所述的微量元素液的组成为：MgSO42.0g，CuSO40.5g，MnSO40.5g， FeSO4·7H2O 0.5g，CaCl20.5g，蒸馏水500mL。
步骤(3)中，
所述的琼脂的重量为无机盐培养基重量的2%;
所述的无机盐培养基与步骤(2)的油性漆废水降解菌系培养液的体积比为 100:1;
所述的梯度稀释为将步骤(2)的油性漆废水降解菌系培养液按照体积分别 稀释103、104、105倍;
所述的无机盐培养基的组分为：NaCl 0.5g，NH4NO30.4g，KH2PO41.0g， K2HPO41.0g，酵母浸粉0.2g，微量元素液4mL，蒸馏水1000mL，调pH值为 7.2;
所述的微量元素液的组成为：MgSO42.0g，CuSO40.5g，MnSO40.5g， FeSO4·7H2O 0.5g，CaCl20.5g，蒸馏水500mL。
步骤(4)中，
所述的LB平板培养基的组成为：蛋白胨2.5g，牛肉膏0.75g，NaCl 1.25g， 蒸馏水250mL。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：本发明采用生物法处理油 性漆废水，具有能耗低、反应条件温和且效率较高。本发明具有专属适应性微 生物的筛选驯化培养，降解菌株对油性漆废水的降解效率可以达到80%以上， 对于提高生物反应系统的耐受性和稳定性、提高降解效率具有重要意义。