申请日2016.04.19
公开(公告)日2016.09.07
IPC分类号G01N30/02
摘要
本发明提供了一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，属于分析化学领域;其所述的测试方法包括前处理、离心、富集、洗脱、HPLC检测五个步骤，可检测磺胺类、四环素类、大环内酯类三大类抗生素。本发明可以同时检测三大类抗生素，检测效果好，通过对样品的前处理，去除干扰项;本发明操作简单，建立了前处理、提取、测定的分析方法，在短时间内就可以对九大类抗生素进行快速的分离检测，具有可操作性强、高效、快速等优点。
权利要求书
1.一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)前处理：取一定量的畜禽养殖废水，加入柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠，调节pH值至3.5-4.5。
(2)离心：将经过步骤(1)处理的水样加入乙腈：乙酸=99-99.9:1的离心试剂，然后进行离心分离，取离心上清液;
(3)富集：依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完毕后用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干;
(4)洗脱：将步骤(3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈=55:5:40的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品;
(5)HPLC检测：将浓缩液用乙腈：四氢呋喃=90:10的混合液定容，进行高效液相色谱检测。
2.根据权利要求1所述的测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，所述的检测的抗生素包括磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素。
3.根据权利要求1所述的测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中柠檬酸的添加量为0.1～1%(w/w)，乙二胺四乙酸二钠的添加量为0.2-1.5%(w/w)。
4.根据权利要求1所述的测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，流动相：乙腈：四氢呋喃：0.5%的乙酸溶液(72：18：10);流速：1.0mL/min;柱温：30℃;进样量：
说明书
一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法。
背景技术
在国内外的规模化畜禽养殖场中，抗生素被广泛地添加到动物饲料和饮用水中，用以预防和治疗动物传染病及促进动物生长。抗生素可能在动物体内选择性地培育出耐药菌株，通过食物链间接传染到人类，而进入环境中的耐药菌株通过直接接触感染人类。此外，长期饮用含低浓度抗生素的自来水，也可能在人体内选择性地培育出耐药菌株。由于很多兽用和人用抗生素的化学结构相同或相似(从而其作用机理也相同或相似)，在动物和人体内的细菌中已经发现同样的耐药基因。畜禽养殖业是环境水体中抗生素的主要来源之一。
抗生素的检测对于抗生素的有效去除、在环境中的迁移转化、生物有效性、生态毒理性等方面具有重大的现实意义。目前，抗生素的检测方法的检测方法主要有微生物法、免疫分析法、HPLC、毛细管电泳法、薄层色谱法、pH计法等，不同的检测方法适用于不用的领域。
畜禽养殖废水中普遍存在磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素，对于这三类抗生素的检测已有相关的文献和专利，其中CN201110267859公开了一种测定土壤、污泥及动物废水中磺胺类及四环素类抗生素的方法，CN201310247043公开了一种同时检测水中四环素类抗生素的方法。但对于同时检测三大类的抗生素的方法没有相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，本检测方法可以同时检测磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素，操作简便，节约时间。
本发明中所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：一种测定畜禽养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)前处理：取一定量的畜禽养殖废水，加入柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠，调节pH值至3.5-4.5。
(2)离心：将经过步骤(1)处理的水样加入乙腈：乙酸=99-99.9:1的离心试剂，然后进行离心分离，取离心上清液;
(3)富集：依次用甲醇、乙腈和超纯水活化HLB小柱，然后通入待富集水样，富集完毕后用超纯水淋洗，并在真空条件下抽干;
(4)洗脱：将步骤(3)中的HLB小柱用甲醇：四氢呋喃：乙腈=55:5:40的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液并浓缩，得到浓缩样品;
(5)HPLC检测：将浓缩液用乙腈：四氢呋喃=90:10的混合液定容，进行高效液相色谱检测。
进一步地，所述的检测的抗生素包括磺胺类、四环素类、大环内酯类抗生素。
进一步地，所述的步骤(1)中柠檬酸的添加量为0.1～1%(w/w)，乙二胺四乙酸二钠的添加量为0.2-1.5%(w/w)。
进一步地，所述的HPLC检测的色谱条件为：色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，流动相：乙腈：四氢呋喃：0.5%的乙酸溶液(72：18：10);流速：1.0mL/min;柱温：30℃;进样量：
畜禽养殖废水中的抗生素主要包括磺胺类、四环素类、大环内酯类，其中磺胺类的抗生素包括磺胺噻唑(STZ)、磺胺甲恶唑(SMX)、磺胺地索辛(SDM)、磺胺二甲嘧啶(SMN)、磺胺甲二唑(SML)，四环素类的抗生素包括四环霉素(TCN)、土霉素(OTC)、金霉素(CTC)，大环内酯类的抗生素包括泰妙菌素(TIA)。
本发明的有益效果如下：
本发明可以同时检测三大类抗生素，检测效果好，通过对样品的前处理，去除干扰项;本发明操作简单，建立了前处理、提取、测定的分析方法，在短时间内就可以对九大类抗生素进行快速的分离检测，具有可操作性强、高效、快速等优点。